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Protein Marker使用常见问题解答

Q:条带模糊的原因?

A:

• 电压过高或电泳时间过长,产热过多导致电泳缓冲液温度升高。建议参照Trans产品使用说明书。

• 电泳缓冲液陈旧,建议使用新鲜的电泳缓冲液,为了获得理想的结果建议在使用前预冷缓冲液。

• 分离胶的浓度偏低,建议使用合适的胶浓度。

• 凝胶放置时间过长,建议使用新配制的凝胶电泳。


Q: 为什么有时候带型不整齐?

A:

• 建议点样时将蛋白Marker放在泳道中间。如在凝胶两侧泳道,由于边缘效应、离子强度不均等原因,均会导致带型变宽或弯曲。

• 凝胶配制不匀,凝胶内存有气泡,或点样孔中有细碎的残胶。


Q:电泳时蛋白Marker分离不开?

A:大多为胶浓度不合适,要在推荐的凝胶浓度范围内使用。此外,比较陈旧的凝胶和缓冲液也会造成电泳效果不好。


Q:预染Marker电泳后清晰,但是转膜后颜色很浅?

A:

• 转膜时一定要将胶和膜压紧,否则条带会在转膜过程中丢失或变浅。

• 转膜条件不适合,建议200 mA、2小时,或100 mA过夜转膜。


Q:转膜时甲醇的浓度是多少,会对转膜造成什么影响?

A:甲醇的浓度一般推荐为15%,甲醇浓度太高易造成蛋白穿膜,转移到滤纸上。


Q:发光液配制需要避光吗?

A:不需要避光,但是要现配现用,配制后马上进入暗室进行下面的操作。


Q:发光液的有效曝光时间多长?

A:发光液在2小时以内均可以曝光,但是前30分钟曝光能力较强,随着时间的推移可适当延长曝光时间来调节曝光强度。


Q:曝光后X光片背景很黑是什么原因?

A:背景很黑可能是曝光时间太长或者显影时间过长造成的。


Q:Western Marker 曝光后杂带很多是什么原因?

A:Marker上样量过多或曝光时间过长,可适当减少上样量或曝光时间。此外,二抗的浓度过高或特异性和纯度不高,也会造成杂带较多的结果。

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