mRNA体外合成整体解决方案
mRNA（Messenger RNA），即信使RNA，是以DNA的一条链为模板转录而来，携带遗传信息并指导蛋白质的合成。mRNA疫苗是指将编码抗原的mRNA引入体内，利用宿主细胞自身的蛋白质合成机制产生抗原蛋白，进而触发机体的免疫应答，达到预防疾病的目的。
新冠疫情在全球的肆虐，促进了mRNA技术的发展，使其成为2021年《麻省理工科技评论》发布的“全球十大突破性技术”之首。也将疫苗的研发推上了新的高潮，全球的大型药企均在抓紧时间布局新冠疫苗的研发。到目前为止，被批准进入临床试验的疫苗类型主要包括：灭活疫苗、核酸疫苗、载体疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗和减毒活疫苗。而核酸疫苗中的mRNA疫苗在研发和生产等方面具备显著优势，凭借其研发周期短、抗原选择范围广；安全性高；有效性高、稳定性好；生产难度低、速度快等优势，吸引了越来越多的企业进入到mRNA疫苗的研发行列。mRNA技术经过30多年的发展已日渐成熟，但要制备安全、高效、稳定的mRNA疫苗，仍然存在一些难题，比如合成与纯化足够蛋白表达量的mRNA，mRNA在体内的有效靶向递送等。
mRNA疫苗的研发与生产流程主要包括以下步骤：
1. 筛选分离目标病原体；
2. 利用NGS技术进行基因测序；
3. 筛选出对感染或复制重要的编码目标蛋白对应的基因序列（或直接提取mRNA）构建pDNA质粒；
4. 体外转录：通常使用限制性核酸内切酶线性化的pDNA质粒作为模板，酶切位点选择在质粒3’端的下游位置，随后再次使用沉淀和提取纯化线性DNA。转录过程还需要的一些酶包括：来自T7、T3或SP6噬菌体的RNA聚合酶、RNA酶抑制剂和无机焦磷酸酶（去除RNA合成过程中产生的的焦磷酸酯并竞争性地抑制转录）。最后，使用RNase-free的DNA酶消化模板DNA。
5. 对mRNA进行高度纯化；
6. 制备mRNA无菌制剂；
7. 配送给需要接种的人群。
疫情当前，国内外许多企业和机构大量投入研发，建立mRNA疫苗新型研发平台。作为国产生物试剂优质供应商，全式金为这些企业提供一系列相关产品，助力mRNA疫苗研发。
目标抗原靶点筛选
1. TransStart® FastPfu Fly DNA Polymerase（AP231）
一种用于快速PCR的热启动超高保真DNA聚合酶，该酶扩增速度更快 (6 kb/min)，扩增效率更高，产量更高，保真性更高，灵敏度更高。
· 保真性是EasyTaq® DNA Polymerase的108倍。
· 扩增产物为平端，可直接克隆于pEASY®-Blunt 系列载体中。
· 基因组DNA 片段的扩增 (≤ 15 kb)。
· Plasmid DNA片段扩增 (≤ 20 kb)。
dNTPs是PCR的重要组成，它的质量好坏严重影响PCR的保真性、特异性、扩增效率。High Pure dNTPs（AD101）是美国进口，市场上纯度较高的dNTPs，纯度在99%以上，不含DNase和RNase。
质粒及模板制备
1. EasyPure® EndoFree Plasmid MaxiPrep Kit（EM122）
利用硅胶膜离心柱特异地吸附DNA，适用于从≤500 ml LB培养基培养的大肠杆菌中高效地提取质粒DNA，可通过颜色变化识别裂解、中和是否完全，实现操作的可视化；柱上去除内毒素，操作简便快速。提取的质粒DNA适用于酶切、连接、转化、测序等实验。
2. EasyPure® EndoFree Pro Plasmid MaxiPrep Kit（EM123）
利用硅胶膜离心柱特异地吸附DNA，适用于从≤500 ml LB培养基培养的大肠杆菌中高效地提取质粒DNA，操作简单，提取速度快，DNA纯度高。提取的质粒DNA适用于酶切、连接、转化、测序等实验。
3. FlyCut® 系列内切酶
FlyCut® 系列5分钟快速内切酶，配有通用的专利性配方的特殊缓冲液，具有省时、高效（酶切效率高，无星号活性）的特点。
4. Phi29 DNA Polymerase（LP101）
由重组φ29 DNA polymerase 基因的载体，在大肠杆菌中经诱导表达、纯化而成, 分子量为74.4 kDa。具有高保真、高效率、高灵敏度、高产量的特点，用于测序、SNP基因分型、STR/微卫星分析、病毒检测和miRNA检测。
体外转录
1. T7 High Efficiency Transcription Kit（JT101）
利用T7 RNA Polymerase，以含有T7启动子的超螺旋质粒DNA或线性DNA为模板，对T7启动子下游的DNA序列进行高效转录。适用于制备长度超过6000 nt的高浓度RNA，制备的RNA可用于体外翻译、RNase保护实验、RNA剪切以及杂交探针标记等。全式金T7 RNA聚合酶转录试剂盒在每20 μl体系中，1 μg模板可以生成150-280 μg的RNA。
2. Ribonuclease Inhibitor（AI101）
在mRNA疫苗研发和生产过程需要保持mRNA的稳定性以保证疫苗高质量生产。全式金RNase抑制剂酶Ribonuclease Inhibitor是经大肠杆菌表达、纯化的人胎盘的重组蛋白，特异性地抑制RNase A、RNase B和RNase C，活性高能够显著稳定mRNA的存在。
3. DNase I (RNase-free ) （GD201）
在mRNA疫苗生产的过程中对DNA的残留控制非常严格，全式金DNase I (RNase-free )能够随机分解DNA单/双链，酶活性高，性能优。
mRNA修饰
本产品包含牛痘病毒加帽酶、mRNA帽结构2’-O-甲基转移酶和其他加帽反应组分，可用于对T7体外转录（JT101）产生的RNA进行5’加帽修饰，具有高效、高灵活性、操作简便等特点。反应产物为Cap1-mRNA，加帽效率可接近100%，并且帽子结构方向正确，对于mRNA的稳定、转运（出核）、翻译过程均有重要作用。
2. mRNA Poly(A) Tailing Kit（LA201）
本产品反应时不依赖模板的存在，催化ATP转化为AMP并依次掺入到RNA的3´ 末端，即在mRNA的3´ 端加Poly(A) 尾，提高RNA在细胞中的稳定性。本产品具有很高的加尾效率，且可平行放大体系用于在体外转录（JT101）及加帽后（LC101）mRNA 的加尾修饰，制备可用于细胞转染的RNA样品。具有高效率、高灵活性、操作简便等特点。
样品纯化
DNA纯化
1. MagicPure® Size Selection DNA Beads（EC401）
基于Solid Phase Reverse Immobilization (SPRI) 原理，采用具有独特分离作用的磁珠与缓冲液系统，适用于DNA纯化、DNA浓缩、高通量测序文库构建中DNA片段分选，使用方法可与主流文库构建试剂盒兼容。
RNA纯化
1. MagicPure® mRNA Kit (EC511)
偶联了Oligo (dT)的磁珠与带Poly(A)尾的mRNA特异结合，纯化后的mRNA纯度高，完整性好，得到的mRNA适用于RT-PCR、qRT-PCR、二代测序等。本试剂盒适用于磁棒式高通量核酸提取仪。
2. EasyPure® RNA Purification Kit (ER701)
利用硅胶膜离心柱特异地吸附RNA，纯化经DNase I处理的总RNA产物、体外转录产物、RNA标记产物、合成RNA等，能有效地去除蛋白质、有机化合物、无机盐离子等杂质，操作简便、快速。
3. MagicPure® RNA Beads (EC501)
利用独特的磁珠与缓冲液系统，特异地吸附RNA，纯化去除rRNA的RNA产物，经DNase I处理的RNA产物，纯化体外转录产物、RNA标记产物和合成RNA等。操作简便、快速。
mRNA转染
TransIntro® mRNA Transfection Reagent (FT501)
一款高性能的mRNA专用的阳离子聚合物转染试剂，可直接将mRNA传递到细胞质中进行表达，避免了转录调控作用及进入细胞核的限制，比常规DNA转染方法效率更高。该试剂毒性低，转染效率高，对常规细胞和难转染细胞均有比较好的效果，且不受血清和抗生素的影响，性能稳定。
基因测序
全式金拥有DNA文库构建、RNA文库构建、rRNA去除试剂盒、mRNA捕获试剂盒及文库扩增试剂盒等产品。
1. DNA文库构建（转座酶法/传统DNA建库法/片段化酶法）
★TransNGS® Tn5 DNA Library Prep Kit for Illumina® (for 50 ng/5 ng/1 ng DNA) (KP101/KP121/KP111)
★TransNGS® DNA Library Prep Kit for Illumina® (KP201)
★TransNGS® Fragmentase DNA Library Prep Kit for Illumina®(KP231)
★TransNGS® Fragmentase DNA Library Prep Kit for Illumina®(KP241)
2. RNA文库构建
★TransNGS® Fast RNA-Seq Library Prep Kit for Illumina®（KP701）
★TransNGS® Fast RNA-Seq Library Prep Kit for MGI®（KP801）
3. rRNA去除（人/小鼠/大鼠）
★TransNGS® rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat) (KD101)
4. mRNA磁珠捕获
★MagicPure® mRNA Kit（EC511）
5. 文库扩增及qPCR精确定量
★TransNGS® Library Amplification SuperMix（KA101）
★TransNGS® Library Quantification Kit for Illumina®（KQ101）
自动核酸提取仪
TS-32/96自动核酸提取仪是采用先进磁珠分离技术的高科技产品，具有自动化程度高，提取速度快，结果稳定，操作简便的优点。全式金作为国内知名的核酸分离纯化技术公司，可提供多种配套提取试剂盒，使仪器的使用范围最大化，成本低廉化。
mRNA疫苗是一种通用的新型平台技术，将来应用前景十分广泛，不仅仅是新冠等感染性疾病，还有望用于癌症等诸多领域。针对mRNA疫苗研发生产，全式金拥有完整的mRNA体外合成产品线，能提供一系列体外合成酶及试剂，帮助各位客户朋友们应对研发过程中各项关键技术挑战，助力开创疾病治疗的“mRNA时代”。
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