支原体污染解决方案

支原体是一种类似细菌但不具有细胞壁的原核微生物，直径在 50-300 nm，可轻松通过一般滤膜（0.22 μm）混入培养系统中，普通的抗生素（如培养细胞常用的双抗）对它不起作用。支原体以寄生和共生方式存活，部分可能导致动物、植物宿主的病变。

支原体是细胞污染物中比较常见的一种，来源广泛，常见的主要来自培养试剂、人员操作、细胞间交叉污染及组织来源。受支原体污染的细胞生长会变慢，状态会变差，虽不会马上使细胞致死，但却会影响细胞内的各种参数，如改变细胞膜抗原性，改变细胞新陈代谢，干扰核酸的合成，改变 DNA 转染效率，导致染色体畸变等，这些影响会造成实验结果不准确，重复性差，甚至得出错误的结论。2013年业界顶级期刊《Nature》已正式要求投稿的文章如涉及细胞培养，都必须要进行支原体检测。此外，支原体污染检测也是生物药研发与生产的重要质控指标，必须在生物药产品开发的各个阶段进行，包括原材料、细胞库、病毒种子库、未加工的收获液材料和最终产品。

常见的支原体检测方法

支原体不仅仅会影响细胞状态，在实验过程中受污染的支原体会成为感染源可以感染其它细胞，因此支原体的去除与预防也至关重要。全式金推出快速、高效的支原体检测试剂，高去除率、低毒性的去除试剂及使用方便、可替代双抗的预防试剂，全方位助力消除支原体污染。

支原体检测

TransDetect^® PCR Mycoplasma Detection Kit

本产品通过 PCR 方法检测培养细胞等生物材料中的支原体，针对支原体 16S rRNA 序列保守区域设计特异引物，直接使用细胞培养液作为模板，特异性扩增支原体 DNA，具有操作简便、快速（2 小时内即可出结果）、 特异性强、灵敏度高的特点。

• 灵敏度高，可检测到低至 20 个拷贝的支原体 DNA。

• 特异性强，只扩增支原体 DNA，真核细胞和细菌 DNA 不被扩增。

• 操作简便，无需提取基因组 DNA，适合大量细胞样品的检测。

• 配有阳性对照与阴性对照，保证 PCR 检测结果的准确性。

TransDetect^® Luciferase Mycoplasma Detection Kit

本产品利用支原体中所特有的酶设计而成，该酶分解 MycoDetect Substrate 的同时将 ADP 转换成ATP，荧光素酶在 ATP 存在的条件下催化荧光素（luciferin）氧化发出生物荧光，通过检测生物荧光可 以表征细胞培养物是否存在支原体污染。由于检测的是真正具有生物活性的支原体，所以得到的结果 比 PCR 检测方法更加准确。该方法灵敏度高、操作简便、省时。

TransDetect^® qPCR Mycoplasma Detection Kit

本产品采用TaqMan实时荧光定量PCR法检测支原体DNA，用于定性检测如培养基、细胞培养物、生物制品等样品中的支原体污染。可检测的支原体种类涵盖范围广，包括柔膜菌纲（Mollicutes）下的多种支原体（Mycoplasma spp.）、无胆甾原体（Acholeplasma spp.）、螺原体（Spiroplasma spp.）等。本试剂盒按照EP 2.6.7和JP G3支原体检测相关指南和要求进行验证。• 支原体种类覆盖范围广：已验证13 株菌株及质粒DNA 的支原体检测，数据库比对可覆盖至少129 种支原体DNA 序列。

• 灵敏度高：验证的支原体满足95% 的检出要求，检测限可达10 CFU/mL；质粒标准品可达1 copy/μL。

• 特异性高：常见的近20 种细菌、生产用细胞等基因组无检测干扰。

• 稳定性高：产品至少可冻融15 次，产品性能无明显影响。

• dUTP/UDG 防污染系统：有效防止PCR 产物的污染，数据准确。

• 仪器兼容性广：主流qPCR 检测仪器均可兼容，检测结果一致。

灵敏度高

10 种10 CFU/mL 支原体标准株DNA 的扩增结果显示，TransGen 产品在检出限10 CFU/mL 浓度下，检出率可达到100%。（扩增图是发酵支原体标准品检测结果展示）

特异性高

以上物种基因组DNA 的扩增结果均为阴性，表明TransGen 产品特异性高，与非支原体物种无交叉反应。

耐用性高

分别用以上基质稀释阳性支原体悬液，对照基质为无核酸酶水，DNA 提取后进行qPCR 检测。结果表明，各基质组的Ct 值与对照接近， Ct 值滞后不超过0.6，上述基质对支原体检测无明显影响。

支原体去除

 TransSafe^TM Mycoplasma Elimination Reagent (TransMyco Plus) Kit

本产品包含两类抗生素组分，第一类抗生素干扰支原体的蛋白表达，第二类抗生素干扰支原体的 DNA复制，从而可以有效去除支原体污染。本产品对真核细胞干扰小，细胞毒性低，可以保持较高的细胞活率。

• 支原体清除效率高。

• 使用浓度低，细胞毒性小，适用细胞种类广。

• 使用方便，直接加入培养基中即可。

支原体预防

TransSafe^TM Mycoplasma Prevention Reagent

本产品是对支原体具有抑制作用的三种抗生素的混合物，分别为大环内酯类、四环素类和氟喹诺酮类衍生物抗生素，可以有效干扰支原体的蛋白表达和DNA复制。

• 支原体预防效果好，可以最大程度地避免支原体污染。

• 使用浓度低，细胞毒性小，适用细胞种类广。

• 使用方便，直接加入培养基中即可。

• 抗性范围广，可替代双抗预防常见的革兰氏阴性和阳性菌。

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