荧光标记抗体系列

流式细胞术（Flow CytoMetry，FCM）是根据单个细胞不同形态、表面标志物、内容物的差异，利用流式细胞仪检测细胞固有的或特异性标记的信号，从而实现细胞分析与细胞分选目的的一种方法。经过近五十年的发展和完善，流式细胞术技术已经十分成熟，并被广泛的运用于从基础研究到临床实践的各个方面，涵盖了细胞生物学、免疫学、血液学、肿瘤学、药理学、遗传学及临床检验等领域，在各学科中发挥着重要的作用。

随着流式细胞术应用领域的日益广泛，荧光标记产品的种类、数量也在不断增多，加上多色分析实验方案需求的增长，荧光标记抗体如何选择，也成为了流式技术是否能被成功应用的关键因素之一。

➢ 荧光标记抗体

抗体是机体组织在感受到特定外来物质时由浆细胞（效应B细胞）分泌、被免疫系统用来鉴别及中和外来物质如细菌、病毒等的蛋白质。而荧光抗体标记技术是将荧光素以化学方法与特异性抗体共价结合，形成荧光素-蛋白质结合物（即荧光标记抗体），此结合物仍保留着抗体活性，同时具有荧光素的示踪作用。

注：图片来源于网络

➢ 抗体荧光标记的选择

1. 如果实验中检测单一指标：

不同荧光标记在不同的仪器上强度不同。以FACS Calibur仪器为例：PE＞APC＞PE-Cy5＞PerCP-Cy5.5＞FITC＞PerCP，通常来说，PE最强，适用于弱表达抗原。FITC强度较弱，适用于强表达抗原。使用时需根据检测的目标蛋白进行具体选择。

2. 如果同时检测多个指标：

确认流式细胞仪能检测多少个通道：流式抗体每个通道只能选择一种荧光素，且各个通道之间的荧光素可以随意搭配。

3. 常用荧光标记：

FITC、PE、APC、PerCP-Cy5.5等。

➢ 抗体荧光标记的方式

抗体荧光标记的方式包括直接标记和间接标记两种。在流式实验过程中，尽量减少实验工序和过程，以保证实验的真实和准确性。因此在条件允许的范围内，尽量用直接标记的抗体进行实验而不去做间接标记。

➢ 荧光标记抗体的应用

荧光标记抗体目前主要应用于癌症，免疫学，心血管，外泌体，神经科学，发育生物学，MSC，细胞周期、细胞凋亡、细胞增殖/活力研究，细胞信号转导，新陈代谢，临床诊断等领域的研究，典型应用为MSC鉴定和免疫学流式分析等。

1. MSC表面标志物：

国际细胞治疗学会 (ISCT) 认定，MSC细胞表达CD73、CD90 与 CD105，不表达CD11b、CD14、CD19、CD34、CD45、CD79a与HLA-DR，其中CD73、CD90 、CD105、CD45为MSC必检标志物。

2. T淋巴细胞表面标志物：

CD3、CD4、CD8与CD45等。

为更好的满足广大客户对流式抗体的应用需求，全式金自主研发了多款带有不同荧光标记的直标流式抗体，可应用于MSC鉴定和免疫学分析，能够快速高效地进行细胞表面不同标志物的流式检测。

应用领域-MSC鉴定

➢ CD73

CD73蛋白分子量约为70 kD，通常由两个相同的亚基通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定在细胞表面形成同源二聚体，可将单磷酸腺苷(AMP)水解为腺苷。CD73作为淋巴细胞分化的标志，在一些免疫缺陷病中表达减弱。据研究报道，CD73是一种潜在的生物标志物，其高表达与多种类型肿瘤的不良预后密切相关。

• Anti-Human CD73，FITC (HF101) 

• Anti-Human CD73，PE (HF102)

• Anti-Human CD73，APC (HF104)

该产品通过亲和层析纯化CD73单克隆抗体后，在最佳条件下与荧光素FITC、PE、APC偶联制得，用于细胞表面CD73抗原的流式检测。

◇ 明显区分阳性和阴性细胞群

➢ CD105

CD105又称为内皮糖蛋白（Endoglin），是位于细胞表面的I型跨膜蛋白，由同源二聚体组成，分子量约为90 kD。CD105是TGF-β受体复合物之一，高度结合TGF-β1和β3，但与β2不结合。CD105在血管内皮细胞中高度表达，是肿瘤血管生成的标志性分子。

• Anti-Human CD105，PE (HF112)

• Anti-Human CD105，APC (HF114) 

该产品通过亲和层析纯化CD105单克隆抗体后，在最佳条件下与荧光素PE、APC偶联制得，用于细胞表面CD105抗原的流式检测。

➢ CD90

CD90又称为Thy 1，是一种分子量为25-37 kD的糖蛋白，通过糖基磷脂酰肌醇 (GPI) 锚定在细胞膜表面，属于免疫球蛋白超家族。CD90是微血管内皮细胞活化的标志，与新生血管形成有关，也是鉴别MSC的重要标志之一。CD90与β2和β3整合素结合，参与细胞粘附的调控。

• Anti-Human CD90，APC (HF134)

该产品通过亲和层析纯化人CD90单克隆抗体后，在最佳条件下与荧光素APC偶联制得，用于细胞表面CD90抗原的流式检测。

➢ CD45

CD45，也被称为白细胞共同抗原 (LCA) 或蛋白酪氨酸磷酸酶受体C (PTPRC)，由一类结构相似，分子量在180-240 kDa之间的单链I型跨膜糖蛋白组成。CD45是一种酪氨酸磷酸酶，通过使包括p56Lck、p59Fyn和其它Src 家族激酶在内的底物去磷酸化，在T和B细胞抗原受体介导的激活中起关键作用。此外，CD45是细胞膜上信号传导的关键分子，在淋巴细胞的发育成熟、功能调节及信号传递中具有重要意义。

• Anti-Human CD45，FITC (HF121)

•Anti-Human CD45，PerCP-Cy5.5 (HF125)

该产品通过亲和层析纯化CD45单克隆抗体后，在最佳条件下与荧光素FITC、PerCP-Cy5.5偶联制得，用于细胞表面CD45抗原的流式检测。

◇  CD45在MSC细胞表面不表达；在PBMC细胞表面强表达，用CD45-FITC、CD45-PerCP-Cy5.5分别标记后，可明显区分阳性和阴性细胞群。

➢ 多色流式抗体共染

• Human MSC Characterization Kit (HF001)

该产品专门用于人MSC表面标志物的流式检测和鉴定，包含三种用于鉴定人MSC的荧光标记抗体，以及一种用于鉴定非MSC的荧光标记抗体。通过流式检测，MSC表达阳性标志物CD73、CD90和CD105的比例≥ 95%，同时表达阴性标志物CD45的比例≤ 2%。

◇ 产品特点 

❋ 采用多色流式抗体共染，包含CD73+、CD90+、CD105+、CD45-共4种抗体。

❋ 最大限度减少检测所需细胞量。

❋ 特异性强且操作简便，适用于各种来源MSC的鉴定。

◇ 人脐带来源MSC鉴定，其中CD73、CD90和CD105表达比例≥ 95%，CD45表达比例≤ 2%。

应用领域-免疫学流式分析

➢ CD3

CD3，是由五条肽链（CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3η、CD3ζ）组成的蛋白复合物，属于免疫球蛋白超家族的一员。CD3分子与T细胞受体(TCR)结合，共同参与T细胞对抗原的识别、信号转导以及T细胞的活化。该CD3单克隆抗体特异性识别CD3/TCR复合物中的CD3ε链，可用于T细胞的激活和扩增。

• Anti-Human CD3，FITC (HF151)

• Anti-Human CD3，PE (HF152)

• Anti-Human CD3，APC (HF154)

该产品通过亲和层析纯化CD3单克隆抗体后，在最佳条件下与荧光素FITC、PE、APC偶联制得，用于细胞表面CD3抗原的流式检测。

➢ CD4

CD4，是一种55 kDa的单链I型跨膜糖蛋白，为T细胞受体（TCR）识别抗原的共受体，与MHCⅡ类分子的非多肽区结合，参与T细胞TCR识别抗原的信号转导。CD4也是HIV的主要受体。在巨噬细胞或NKT细胞中，CD4在TCR/LCK不依赖信号通路中，调控细胞的分化、激活、细胞因子表达和细胞迁移。

• Anti-Human CD4，FITC (HF141) 

•Anti-Human CD4，PE (HF142) 

• Anti-Human CD4，APC (HF144) 

该产品通过亲和层析纯化CD4单克隆抗体后，在最佳条件下与荧光素FITC、PE、APC偶联制得，主要应用于细胞表面CD4抗原的检测。

◇ 明显区分阳性和阴性细胞群

◇  不同荧光标记的抗体混合染色后，分离效果较好，特异性强。

荧光标记抗体产品信息