产品详情介绍
本产品包含牛痘病毒加帽酶、mRNA帽结构2’-O-甲基转移酶和其他加帽反应组分,可用于对T7体外转录(JT101)产生的RNA进行5’加帽修饰。
真核生物中,转录形成原始mRNA后需要在5'端形成一个特殊的帽子结构,此结构对于mRNA的稳定、转运(出核)、翻译过程均有重要作用。通过加帽酶的酶促反应对RNA的5’端进行加帽修饰是一种简单有效的方法:牛痘病毒加帽酶 (Vaccinia Capping Enzyme)能够将7-甲基鸟苷酸帽子 (m7Gppp,Cap0)连接至RNA 5’端,形成m7Gppp5’N-mRNA (Cap0-mRNA);mRNA帽结构2’-O-甲基转移酶 (mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase)以Cap0-mRNA为底物,以SAM (S-腺苷甲硫氨酸)作为甲基供体将Cap0-mRNA 5’端紧邻帽结构的第一个核苷酸的2'-OH甲基化,形成Cap1-mRNA。Cap1结构能够提高mRNA稳定性,有助于增强其细胞转染和显微注射实验中的表达能力。
本产品通过在加帽反应中同时使用牛痘病毒加帽酶和mRNA Cap-2'-O-甲基转移酶,使得加帽反应可以在同一体系中完成,反应产物为Cap1-mRNA,加帽效率可接近100%,并且帽子结构方向正确。
荧光镜检和流式细胞分选结果表明,TransGen产品加帽修饰的mRNA转染CHO细胞后的表达效率显著高于Company N产品。
荧光镜检和流式细胞分选结果表明,利用TransGen mRNA体外合成系列产品(LC101)合成的mRNA毒性低、稳定性好、翻译效率高,在不同类型的哺乳动物细胞中成功且稳定表达。