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全式金产品再登《Science》杂志

 核仁是真核细胞间期核中最明显的结构。它位于细胞核中。为生殖做出了贡献,并聚集着核糖体。曾经集合的核糖体从细胞核中出来,进入细胞质。对核仁结构、动态和功能的研究,不仅为早期细胞学家所密切注意,而且在20世纪60年代发现核仁的重要功能以后,也一直受到各相关领域研究者的高度重视。


全式金产品再登《Science》杂志


 2021年7月30日,中国科学院分子细胞科学卓越创新中心(生物化学与细胞生物学研究所)陈玲玲研究组和刘珈泉研究组在《Science》发表了合作研究成果“lncRNA SLERT controls phase separation of FC/DFCs to facilitate Pol I transcription”,并获同期Perspectives专评。该研究首次揭示了长非编码RNA SLERT以RNA分子伴侣机制改变互作核仁蛋白DDX21构象进而影响FC/DFC区域的大小和流动性,维持RNA聚合酶I高效转录生成核糖体RNA。


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(A)左上:体外相分离实验中,纤维状DDX21的形成随蛋白浓度降低而减弱;左下:在不同的实验体系中,不同浓度的DDX21蛋白呈现不同的分子状态,SLERT可以增加DDX21蛋白的流动性;右:体内实验和体外重构实验中,SLERT通过结合DDX21增加FC/DFC转录单元的大小和流动性。

(B)DDX21分子抱团聚集在核仁DFC区域的外侧,并且限制FC/DFC区域的大小和流动性。SLERT调控DDX21的构象由开放转为闭合,DDX21分子呈现低聚的疏松状态,为Pol I的高效转录提供合适的空间环境。Pol I转录发生在FC和DFC的交界处,DDX21卷曲缠绕rDNA阻止Pol I转录复合物在rDNA的占位。SLERT调控DDX21的构象和流动性抑制DDX21对rDNA的缠绕从而促进Pol I转录。


 该工作首次发现SLERT以RNA分子伴侣机制调控蛋白质的构象和多聚状态并且观察到单分子水平下蛋白质微观相分离的功能特征和调控机制。蛋白质的多聚状态与其流动性,分子间相互作用以及功能发挥直接相关,RNA分子伴侣通过跨越数量级调控核仁蛋白质相分离特性维持细胞核仁正常的形态功能,对lncRNA领域和相分离领域的深入研究具有重大意义。

 全式金无缝拼接系列产品pEASY®-Basic Seamless Cloning and Assembly Kit(CU201)与感受态细胞产品Transetta(DE3) Chemically Competent Cell(CD801)携手助力该项研究。

产品优势:

1、pEASY®-Basic Seamless Cloning and Assembly Kit(CU201)

 利用特殊的重组酶和同源重组的原理,可以将任意方法线性化后的载体和与其两端具有15-25 bp 重叠区域的PCR 片段定向重组,可实现1-5 个片段的高效无缝拼接。

 - 快速:仅需要15分钟反应时间。

 - 简单:不受片段酶切位点的影响,无需对片段酶切。

 - 高效:阳性率达95%以上。

 - 无缝:不引入额外的序列。


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单片段高效连接实验

 1 kb PCR 片段插入pUC19 载体后,PCR 鉴定插入效果。结果显示,插入片段的阳性率达100%。


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单片段插入后,挑取60 个单克隆菌落进行PCR 鉴定

M: Trans2K® Plus II DNA Marker


不同长度单片段连接实验

 不同长度PCR片段(50 bp、2 kb、5 kb、8 kb)分别插入PG载体后,分别用内切酶酶切鉴定插入效果。结果显示,不同长度的PCR片段均正确插入PG载体。


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单片段插入后酶切


不同长度多片段连接实验

 不同长度PCR片段(600 bp,900 bp,1200 bp,1500 bp,1800 bp,片段两端设计Nde I酶切位点),混合后插入pUC19载体后,Nde I酶切鉴定插入效果。结果显示,不同长度的PCR片段均正确插入pUC19载体。


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多片段插入后酶切


2、Transetta(DE3) Chemically Competent Cell(CD801)

 Transetta(DE3)是采用进口菌株,特殊工艺制作,可用于DNA的化学转化。细胞具有氯霉素(Camr)抗性。使用pUC19质粒DNA检测,转化效率可达107 cfu/μg DNA。使用Control Plasmid I (Amp+)用于检测细胞是否具有表达功能,表达蛋白大小为25 kDa。

特点

 该菌株是携带氯霉素抗性质粒BL21的衍生菌,补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA, AGG, AGA,CUA, CCC, GGA)对应的tRNA,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。

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全式金产品一次次登上CNS,是对全式金人的鼓舞与认可。未来我们将继续秉持“品质高于一切,精品服务科研”的理念,为客户提供高品质产品,助力科研。

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