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肿瘤坏死因子α (Tumor necrosis factor-α,TNF-α),是一种多功能的细胞因子,主要由活化的巨噬细胞和单核细胞产生并分泌,能够直接杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无明显毒性。TNF-α还具有多种免疫调节作用,作为一种内源性热原,能够诱导发烧,细胞死亡,恶病质,炎症并抑制肿瘤发生和病毒复制,并通过细胞产生IL-1和IL-6对败血症做出反应。TNF-α的表达失调与多种疾病有关,如感染、自身免疫性疾病、癌症、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、炎症性肠病和椎间盘退变等。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆和细胞培养上清中的TNF-α含量。本试剂盒采用高亲和力的抗人TNF-α抗体预包被酶标板,将标准品/待测样本加入微板孔中,经过孵育后样本中存在的TNF-α会与酶标板上的预包被抗体特异性结合。洗涤去除未结合物后,将生物素标记的抗人TNF-α检测抗体加入微板孔中,再次孵育后检测抗体会与锚定在酶标板上的TNF-α特异性结合。随后,将辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)加至微孔板中并孵育,通过检测抗体上的生物素和链霉亲和素发生的高强度非共价结合,形成“包被抗体-人TNF-α蛋白-检测抗体-Streptavidin-HRP”免疫复合物。再次洗涤后,将显色底物TMB加至微板孔中,HRP会催化TMB底物生成蓝色产物,颜色反应的深浅将与样本中TNF-α的浓度成正相关。而后加入终止液终止反应,在450 nm波长(参考波长570 - 630 nm)处测定吸光度值。通过绘制标准曲线,由样本吸光度值可计算出样本中所含TNF-α浓度。本试剂盒特异性强、检测灵敏度高,同时操作更加便捷。
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